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En attendant un manuel détaillé sur l'utilisation des microscopes de DISCO, vous trouverez ici quelques informations vous permettant de mieux appréhender les expériences possibles sur DISCO.
Les deux microscopes reçoivent une lumière monochromatique sélectionnable rapidement entre 200 et 600 nm. Le premier, POLYPHEME, est dédié à la microspectroscopie de fluorescence UV, le deuxième, TELEMOS, à l'imagerie plein champ UV.
Référence: Jamme, F., Villette, S., Giuliani, A., Rouam, V., Wien, F., Lagarde, B., & Refregiers, M. Synchrotron UV Fluorescence Microscopy Uncovers New Probes in Cells and Tissues. Microscopy and Microanalysis, 2010, 16(5): 507-514
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Préparation des échantillons :
Les deux microscopes sont des statifs inversés, le premier est un IX71, le deuxième un axioobserver Z1. La plupart des échantillons seront donc placés tête en bas avec une lamelle couvre objet en quartz. Les deux objectifs principaux sont à immersion à glycérine, il est également possible d'utiliser des objectifs à air à longue distance de travail.
• Cellules
Nous possédons une cellule attofluor (Invitrogen). Elle permet de recevoir des cellules qui ont poussé sur une lamelle ronde en suprasyl (nous contacter si vous désirez recevoir de telles lamelles). Si vous possédez vos propres chambres d'incubation, n'hésitez pas à nous contacter.
• Tissus
Nous conseillons de déposer les biopsies ou coupes sur des lames sans monter de lamelles sauf si vous avez des lamelles UV. Les épaisseurs peuvent varier entre 1 et 10 µm environ, pour des demandes spécifiques n'hésitez pas à nous contacter. Certains milieux de montage transparents aux UVs peuvent être utilisés.
Platine PI de POLYPHEME
PI 542.2CD – 80x80 mm aperture – 100x100 μm travel range
Liste des objectifs
40x Ultrafluar Zeiss Glyc
N.A: 0.6
Working distance: 0.36
Features: Infinity corrected | 100x Ultrafluar Zeiss Glyc
N.A: 1.25
Working distance: 0.17
Features: | 40x OFR LMU
N.A: 0.5 mm
Working distance: 1 mm
Features: Infinity corrected | 10x Ultrafluar Zeiss
N.A: 0.2
Working distance: 7.4
Features: Infinity corrected |
Liste des filtres accessibles sur TELEMOS :
• Dichroïques
DM300, DM400, DM505
• Passe-bandes et passes-hauts
Un panel de filtres passes bandes à l'émission sont utilisables. Ce sont des filtres 1" provenant de chez Omega Filters. Vous pouvez aussi amener vos propres filtres ou discuter avec l'équipe de ligne pour des achats spécifiques pouvant profiter au plus grand nombre.
Tableau des filtres passes bandes de Polypheme | Nom | XF1009 | QMAX/EM600-650 | QMAX/EX355-405 | QMAX/EX530-570 |
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| | Description | OMEGA | OMEGA | OMEGA | OMEGA |
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Liste des fluorochromes excitables en UV :
• Pour une liste détaillée de fluorochromes endogènes, nous vous conseillons de consulter :
Wagnieres G.A., Star W.M. and Wilson B.C. (1998) ln Vivo Fluorescence Spectroscopy and Imaging for Oncological Applications. Photochem. Photobiol. 68, 603-632
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Les logiciels utilisés sur les deux microscopes :
1) Pour l'acquisition de données
En microspectrofluorimétrie : Labspec
En imagerie plein champ et 3D : µManager
2) Pour l'analyse
Pour le traitement d'images spectrales :
- Labspec
- Matlab
Pour le traitement d'images 2D : ImageJ
Pour la déconvolution d'images et la reconstruction d'images 3D: Huygens
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 | | | Dernières publications en rapport avec la branche:
Guillon, F., Larré, C., Petipas, F., Berger, A., Moussawi, J., Rogniaux, H., A., S., Saulnier, L., Jamme, F., Miquel, M., Lepiniec, L., & Dubreucq, B.
A comprehensive overview of grain development in Brachypodium distachyon variety Bd21.
Journal of Experimental Botany, 2012? 63(2): 739-755
Allouche, F., Hanafi, M., Jamme, F., Robert, P., Guillon, F., & Devaux, M. F. Coupling hyperspectral image data having different spatial resolutions by extending multivariate inter-battery Tucker analysis. Chemometrics and Intelligent Laboratory Systems, 2012, on-line first.
E. Batard, F. Jamme, S. Villette, C. Jacqueline, MF. de la Cochetière, J. Caillon, M. Réfrégiers Diffusion of Ofloxacin in the Endocarditis Vegetation Assessed with Synchrotron Radiation UV Fluorescence Microspectrocopy PLoS ONE, 2011, 6(4): e19440
G. Tawil, F. Jamme, M. Réfrégiers, A. Vikso-Nielsen, P. Colona, A. Buléon In situ tracking of enzymatic breakdown of starch granules by synchrotron UV fluorescence microscopy Anal. Chem, 2011,.83(3): 989–993
Thoury, M.; Echard, J-P.; Refregiers, M.; Berrie, B.; Nevin, A.; Jamme, F.; Bertrand, L. Synchrotron UV-visible multispectral luminescence micro-imaging of historical samples Anal. Chem. 2011, 83(5), 1737-1745
Jamme, F., Villette, S., Giuliani, A., Rouam, V., Wien, F., Lagarde, B., & Refregiers, M. Synchrotron UV Fluorescence Microscopy Uncovers New Probes in Cells and Tissues. Microscopy and Microanalysis, 2010, 16(5): 507-514 | | | | |  |
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